PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Santana L.A.S., Morais F.R., Santana A.M., Voorwald F.A. & Santana A.E. 2017. [Lymphocyte subsets in peripheral blood of adult healthy dogs.] Quantificação de subpopulações linfocitárias no sangue periférico de cães sadios adultos. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(7):754-758. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: luckyvet01@hotmail.com Flow cytometry has established itself as a useful tool in veterinary practice, particularly for small animals practice. Such knowledge has made necessary the establishment of physiological values for different lymphocyte subpopulations, indispensable to understanding the dynamics of lymphoid cellularity in various pathological conditions. In this sense, the objective of this study was to determine, through cytometric technique, lymphocyte subsets of CD5+CD4+, CD5+CD8+ and CD21+ in four different breeds of domestic dogs, so to add information about the immunological profile of different breeds. A total of 40 adult dogs were used (2-7 years), being males and females of Beagles (G1, n=10), Golden Retrievers (G2, n=10), English Bulldogs (G3, n=10) and crossbreed dogs (G4, n=10). Blood samples were collected by jugular venipuncture, using vacuum flasks system (K2-EDTA). Hemogram and processing of samples for flow cytometry were performed within a maximum of 24 hours after blood collection. Samples were analyzed using FACSCanto device (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). FACSDiva software (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) was used to identify and quantify the CD5+ CD4+, CD5+CD8+, and CD21+, which provided the histogram and the respective table with the number of cells identified by immunophenotyping. The data obtained for T helper lymphocyte count, T cytotoxic/suppressor lymphocyte count and B lymphocytes were tabulated and submitted to analysis of variance by F test. Tukey test at 5% probability was used to compare means between the different breeds of dogs. The average values for CD5+CD8+ cell count in peripheral blood in G1, G2, G3 and G4 were of 155, 206, 544 and 503 cells/uL, respectively. The average values for CD5+CD4+ cell count in peripheral blood in G1, G2, G3 and G4 were of 746, 642, 855 and 1101 cells/uL, respectively. The average values for CD21 + cell count in peripheral blood for G1, G2, G3 and G4 were of 171, 299, 494 and 403 cells/uL, respectively. Therefore, The average number of cells obtained for the subsets of cytotoxic T lymphocytes was significantly higher (p<0,05) in the British Bulldogs and crossbreed dogs compared to those found in Beagles and Golden Retrievers. Furthermore, it was observed that the average number of cells obtained for the subsets of B lymphocytes was significantly higher (p<0,05) in English Bulldogs compared to that of Beagles.

• Citometry lymphocytes citometria linfócitos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Santana L.A.S., Morais F.R., Santana A.M., Voorwald F.A. & Santana A.E. 2017. [Lymphocyte subsets in peripheral blood of adult healthy dogs.] Quantificação de subpopulações linfocitárias no sangue periférico de cães sadios adultos. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(7):754-758. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: luckyvet01@hotmail.com A citometria de fluxo vem se firmando como uma ferramenta útil na prática médico-veterinária, particularmente na clínica de pequenos animais. Tal conhecimento tem ensejado o estabelecimento de valores fisiológicos para diferentes subpopulações linfocitárias, indispensáveis à compreensão da dinâmica da celularidade linfóide, em diversas situações patológicas. Assim sendo, o presente ensaio teve como objetivo imunomarcar, por intermédio da técnica citométrica, as subpopulações linfocitárias CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+, em quatro diferentes raças de cães domésticos e sadios, de tal forma a agregar informações sobre o perfil imunológico das diferentes raças. Foram utilizados 40 cães adultos (2-7 anos), machos e fêmeas, das raças Beagle (G1, n=10), Golden Retriever (G2, n=10), Bulldog Inglês (G3, n=10) e sem raça definida (SRD) (G4, n=10). As colheitas de sangue foram realizadas por venipunção jugular, utilizando-se sistema de frascos a vácuo (K2-EDTA). O hemograma e o processamento das amostras para citometria de fluxo foram realizados num prazo máximo de 24 horas após a colheita do sangue. As amostras foram analisadas no citofluorômetro FACSCANTO (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA). Utilizou-se o programa FACSDiva (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA), para identificar e quantificar as células CD5+CD4+, CD5+CD8+ e CD21+, que forneceu o histograma e respectiva tabela com a quantidade de células detectadas pela imunofenotipagem. Os dados obtidos para contagem de linfócitos T auxiliares, T citotóxicos/supressores e linfócitos B foram tabulados e submetidos a Análise de Variância pelo teste F. O teste de Tukey a 5% de probabilidade foi utilizado para comparação das médias entre as diferentes raças de cães. Os valores médios de contagens de células CD5+CD8+ no sangue periférico do G1, G2, G3 e G4 foram de 155, 206, 544 e 503 células/µL, respectivamente. Os valores médios de contagens de células CD5+CD4+ no sangue periférico do G1, G2, G3 e G4 foram de 746, 642, 1101 e 855 células/µL, respectivamente. Os valores médios de contagens de células CD21+ no sangue periférico do G1, G2, G3 e G4 foram de 171, 299, 494 e 403 células/µL, respectivamente. Assim sendo, o número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos T citotóxicos foi significativamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses e cães SRD, comparativamente aqueles encontrados nos grupos de Beagles e Golden Retrievers. Ademais, observou-se que o número médio de células obtido para a subpopulação de linfócitos B foi significavamente maior (p<0,05) nos Bulldogs Ingleses, quando comparado àquele dos Beagles.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Carvalho A.M., Yamada A.L.M., Martins J.R.B., Maia L., Golim M.A., Deffune E., Hussni C.A. & Alves A.L.G. 2013. Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(9):1151-1154. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: anaalves@fmvz.unesp.br The objective of the study was to isolate, cultivate and characterize equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells (PbMSCs). Peripheral blood was collected, followed by the isolation of mononuclear cells using density gradient reagents, and the cultivation of adherent cells. Monoclonal mouse anti-horse CD13, mouse anti-horse CD44, and mouse anti-rat CD90 antibodies were used for the immunophenotypic characterization of the surface of the PbMSCs. These cells were also cultured in specific media for adipogenic and chondrogenic differentiation. There was no expression of the CD13 marker, but CD44 and CD90 were expressed in all of the passages tested. After 14 days of cell differentiation into adipocytes, lipid droplets were observed upon Oil Red O (ORO) staining. Twenty-one days after chondrogenic differentiation, the cells were stained with Alcian Blue. Although the technique for the isolation of these cells requires improvement, the present study demonstrates the partial characterization of PbMSCs, classifying them as a promising type of progenitor cells for use in equine cell therapy.

• mesenchymal stem cells blood células tronco mesenquimais sangue periférico

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Carvalho A.M., Yamada A.L.M., Martins J.R.B., Maia L., Golim M.A., Deffune E., Hussni C.A. & Alves A.L.G. 2013. Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells. [Isolamento e caracterização das células mesenquimais multipotentes estromais derivadas do sangue periférico equino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(9):1151-1154. Departamento de Cirurgia e Anestesiologia Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Junior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: anaalves@fmvz.unesp.br O objetivo deste estudo foi isolar, cultivar e caracterizar as células mesenquimais multipotentes estromais derivadas do sangue periférico (SpCTMs) equino. O sangue periférico foi coletado, seguido do isolamento das células mononucleadas utilizando o reagente de gradiente de densidade e o cultivo das células aderentes. Os anticorpos monoclonais mouse anti-horse CD13, mouse anti-horse CD44 e mouse anti-rat CD90 foram utilizados para a caracterização imunofenotípica da superfície das SpCTMs. Estas células também foram cultivadas utilizando meio de cultura específico para a diferenciação adipogênica e condrogênica. Não houve expressão do marcador CD13, mas os marcadores CD44 e CD90 foram expressos em todas as passagens testadas. Após 14 dias da diferenciação das células em adipócitos, gotículas de lipídeos foram observados através da coloração com Oil Red O. Vinte e um dias após a diferenciação condrogênica, as células foram coradas com o Alcian Blue. Embora a técnica de isolamento destas células necessite ser otimizada, o presente estudo demonstra a caracterização parcial das SpCTMs, classificando-as como um tipo de células progenitoras promissoras para o uso na terapia celular em equinos.